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分光光度計測定種公豬精液密度
更新時間:2018-10-09 點擊次數:3442

操作步驟
1.1 打開 721 型分光光度計電源開關和比色皿室的箱蓋,使光電管在無光照情況下預熱 20 min。
1.2 旋轉波長調節器,選擇 450 nm 為測定所需的單色光波長。
1.3 選擇適當的靈敏度,一般先將靈敏度旋鈕旋至低檔位。
1.4 調 0%:打開比色皿室的箱蓋(關閉光門),用零點調節器調節旋鈕使電表指針在通光度(T 值)
為 0%處。1.5 調 100%:在比色皿中加入豬精液稀釋劑溶液 4 mL,拉動拉桿使其置于光路中,蓋上比色皿室箱蓋(打開光門),調節光量調節旋鈕,使電表指針在 T 值為 100%處。

1.6 反復調節旋鈕,直到關閉光門和打開光門時指針分別指在 T 值為 0%和 100%處為止。

如果 T 值不能調節到 100%,就增大靈敏度,重新調 0%、100%。

1.7 待測溶液的配制:取比色皿一支(以容量為4 mL 比色皿為例),分別加入 3.6 mL 豬精液稀釋劑溶液,0.4 mL 豬原精液混勻,用擦鏡紙擦干比色皿透光面,使其光亮,無氣泡。1.8 將待測溶液置于比色皿并放入比色皿室中,蓋上箱蓋,拉動拉桿將待測溶液置于光路中,此時從指針的位置讀得待測溶液的 T 值或吸光率(A 值)。T 值或吸光率(A 值)根據對照表讀取精液密度。

2 操作技巧
2.1 使用比色皿時,只能拿毛玻璃的兩面,并且必須用擦鏡紙擦干透光面,以保護透光面不受損壞或產生斑痕。用比色皿裝液前必須用所裝溶液沖洗 3 次,避免改變溶液的濃度。
2.2 生豬精液取樣時應取精液瓶中間的液樣。
2.3 生豬精液長期放置會下沉到容器底部,因此,取樣時應搖勻,測量時速度要快,讀數要準。


3 計算方法

利用分光光度計測出 T 值后,根據對照表讀取精液密度(ρ),用于計算稀釋液的加入量和確定分裝瓶數,計算公式如下:
Y=ρ×V×m×(1-n)÷35(億/瓶)

V1=Y×80(mL)

V2=V1-V0

注:ρ 為精液密度,V 為豬精液體積,m 為精子活力,n 為精子畸形率,Y 為瓶數,V0 為采精量,V1 為豬精液稀釋后的體積,V2 為加入稀釋液的體積。按照國家標準 GB/T 25172-2010,精液產品中總精液數為 30~35 億個/瓶,每劑 80 mL。實際生產過程中,精子畸形率通過普通顯微鏡難以檢測,因此,精子畸形率=0%,稀釋后精子活力與之前保持不變。

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