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本文介紹了紫外-可見分光光度計透射比準確度在不同的吸光度測量范圍對測量結果的影響, 從而在儀器的使 用上應選擇在合適的吸光度范圍內。

紫外-可見分光光度計是一種現代化的集光、 機、電、計算機為一體的分析儀器,它廣泛應用于有機 化學、生物化學 、藥品分析、食品檢驗、醫療衛生、環境 保護、生命科學等領域;它將對研究人類的生存, 發展 和生態平衡提供有力的保障。如何正確理解紫外 - 可見分光光度計的各項關鍵指標并正確使用,對我們 的分析有著重要意義 。在工作中經常遇到不同的單 位或同一單位用兩臺經過計量檢定合格的紫外-可 見分光光度計對同一被測樣品進行測量,經過比較測 量結果偏差較大,從而無法定論。實際上他們沒有注 意到不同的儀器在吸光度不同的使用范圍 ,儀器的透 射比(吸光度)準確度對測量結果的影響是不一樣的。 下面試述兩臺經過計量檢定合格的紫外-可見分光 光度計透射比準確度對測量結果的影響。 *, 紫外 -可見分光光度計是根據物質 的分子對紫外、可見區輻射(光)產生的吸收光譜和 的朗伯-比耳定律測量物質的性質和含量的分 析儀器。它可以用下面的數學公式描述 : A =-lo gτ=εbC 式中 , A 為吸光度;τ為透射比 ;ε為摩爾吸光系 數;b 為液層厚度;C 為濃度。 朗伯-比耳定律是光度分析中定量分析的基 礎、根本的依據 。從理論上說,朗伯 -比耳定律只 適用于單色光,均勻、相互獨立的無相互作用的吸收 粒子體系,因此非單色光 ,化學因素, 雜散光, 及測定 時的溫度 ,壓力、光學傳感器的非線性、電子學的噪 聲、儀器的光譜帶寬等都可引起朗伯 -比耳定律的偏 離。在實際工作中,除了要注意測試波長和參比溶液 的選擇外,若被測樣品的吸光度太大(濃度太高)或太 小(濃度太稀),都可能產生朗伯-比耳定律的偏離。 如按照 JJG375 -1996《單光束紫外 -可見分光 光度計》和 JJG682 -1990《雙光束紫外 -可見分光 光度計計》計量檢定規程要求,目前我國評價高精度 紫外-可見分光光度計儀器的透射比準確度在 ±0 . 5 %τ范圍內, 則該儀器合格。

表 1 列出了一臺儀器 的透射比準確度為 +0 .5 %τ, 一臺儀器的透射比準 確度為 -0 .5 %τ的兩臺儀器在 2 %-98 %的透射比 范圍內測量結果之間的比較通過上面數據可以看出, 當一臺儀器透射比準 確度為正誤差極限, 和另一臺儀器透射比準確度為 負誤差極限 ,并且透射比大于 80 %τ(吸光度小于 0 . 071A),或小于 10 %τ(吸光度大于 1 .301A)時, 兩臺 儀器測量結果的相對誤差較大, 因此一般的紫外 - 可見分光光度計不適合高濃度和極低濃度的分析, 因此應該通過改變待測樣品的濃度或改變吸收池厚 度 ,是被測樣品的吸光度處在適當的范圍內,才能使 兩者測量數據較為一致性。